大鼠脂肪因子Vaspin基因的克隆与原核表达

• 作者: 于纪棉 倪晶晶 孟香红 张玉琳 王建峰 陶冬英
• 来源期刊: 中国卫生检验杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 脂肪因子 Vaspin基因 原核表达
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 164-166,169
• 页数: 4页
• 分类号: Q434.1+1
• 语种: 中文

摘要

目的 构建大鼠脂肪因子Vaspin高效原核表达载体,并获得纯化的Vaspin蛋白.方法 以大鼠睾丸脂肪细胞总RNA为模板,RT-PCR扩增Vaspin基因,亚克隆到原核表达载体pET-30a(+)获得重组质粒pET-30a-Vaspin,转化至E.coli BL21(DE3)菌株中进行诱导表达,SDS-PAGE电泳检测表达产物,用Ni柱进行纯化重组蛋白,Western blot鉴定其特异性.结果 测序结果表明克隆的Vaspin基因序列正确,构建的原核表达载体可以成功表达分子量为50 kDa的重组蛋白,Western blot结果证实该蛋白为大鼠脂肪因子Vaspin.结论 完成了大鼠脂肪因子Vaspin基因的克隆,成功构建了原核表达载体,并在BL21(DE3)菌株中高表达,为进一步研究Vaspin在胰岛素抵抗及肥胖中的作用机制奠定了基础.