油菜乙酰羟基酸合酶基因 BnAHAS1的克隆及其重组蛋白质的原核表达

• 作者: 孔令娜 张洁夫 戚存扣 浦惠明 胡茂龙 陈松 高建芹 龙卫华
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 乙酰羟基酸合酶 除草剂 油菜 基因克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 页码范围: 986-991
• 页数: 6页
• 分类号: S565.4.035.3
• 字数: 4667字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2014.05.010

摘要

利用RT-PCR技术从甘蓝型油菜宁油16号( Brassica napus L.)中克隆到乙酰羟基酸合酶基因BnA-HAS1的cDNA序列,该序列含有1个1968 bp的开放阅读框,编码蛋白质655个氨基酸,分子量约为7.1×104,预测等电点为6.16。将该基因克隆到原核表达载体pCold II中,经酶切和测序鉴定后,将正确的重组质粒pCold II-BnA-HAS1导入大肠杆菌 BL21(DE3)。在15℃下以终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导12 h后,获得预期大小的重组蛋白质His-BnAHAS1,并用Western blot确定此重组蛋白质为目的蛋白质。