核磷蛋白NPM1的RNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定

• 作者: 张宪 王亚楠 金蕊 马世良 黄君健
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 核磷蛋白1 RNA干扰 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 21-24
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3094字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2014.01.005

摘要

目的：构建高效抑制核磷蛋白NPM1基因的短发夹RNA（shRNA）干扰载体。方法：以人NPM1基因为靶序列，设计并合成shRNA序列，将其连入RNA干扰慢病毒载体pll3.7；酶切鉴定插入shRNA序列片段的质粒，经测序正确后转染293T细胞；Western印迹检测得到抑制效果好的载体pll-shRNA，将其与慢病毒载体共转染293T细胞，进行病毒的包装，将得到的病毒感染HT1080细胞，通过RT-PCR、Western印迹等方法验证其抑制效果。结果：酶切证实构建的载体pll-shRNA中已插入外源基因片段，转染293T细胞后都有抑制效果，其中pll-shRNA2的抑制效果最好；用pll-shRNA2病毒感染HT1080细胞，RT-PCR和Western印迹检测分别在RNA和蛋白质水平证实NPM1的表达显著降低。结论：构建的RNA干扰载体pll-shRNA2能有效抑制NPM1的表达，为NPM1功能的研究提供了有力工具。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	金蕊	军事医学科学院生物工程研究所	8	7	2.0	2.0
2	黄君健	军事医学科学院生物工程研究所	31	171	4.0	12.0
3	马世良	沈阳农业大学生物科学技术学院	12	35	4.0	5.0
4	王亚楠	沈阳农业大学生物科学技术学院	3	0	0.0	0.0
8	张宪	军事医学科学院生物工程研究所	1	0	0.0	0.0