羊口疮病毒ORF125基因编码蛋白的结构预测及其在真核表达质粒转染细胞中的定位

• 作者: 刘永杰 刘湘涛 吴斌 孔汉金 尚佑军 张克山
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 羊口疮病毒 ORF125序列分析 亚细胞定位 基因结构
• 年，卷（期）: 2014,（8）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 1375-1380
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.1
• 字数: 3601字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2014.08.025

摘要

旨在预测羊口疮病毒(ORFV)ORF125蛋白结构及其在真核表达质粒转染细胞中的定位.设计引物PCR扩增ORF125基因,并将其定向克隆至pEGFP-N1真核表达载体,经酶切鉴定及序列测定后得到阳性重组表达质粒pEGFP-ORF125.利用DNAStar和MEGA4.0元件分析不同毒株间ORF125基因的遗传进化关系,接着通过在线Expasy工具预测其二级结构并与Bcl 2家族成员进行比较.利用脂质体介导法转染山羊皮肤成纤维细胞(GSFs),经DAPI染色后在激光共聚焦显微镜下观察ORF125的亚细胞定位.结果显示:本次克隆的ORFV ORF125基因与国外公布的其他羊口疮毒株核苷酸水平相似性为97.1％～98.1％,与同属另外2株羊伪牛痘病毒相比,核苷酸相似性分别为84.1％(GQ329669)和85.6％(GQ329670);蛋白二级结构预测分析发现ORF125与Bcl-2家族成员α-螺旋位置相近,预测空间结构有很大的相似性;激光共聚焦显微镜观察发现ORF125在GSFs细胞质中呈弥散性分布.结果提示,羊口疮病毒ORF125基因非常保守,预测与Bcl 2蛋白有着相似的功能,重组质粒pEGFP-ORF125构建成功,ORF125基因在GSFs中得到表达,定位于细胞质中.