肠炎沙门菌I型菌毛主要亚单位FimA原核表达及纯化

• 作者: 周明旭 孟霞 朱国强 杨溢 段进坤 王勇祥 陶洁
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 肠炎沙门菌 非编码sRNA IsrE FimA 原核表达
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 页码范围: 18-24
• 页数: 7页
• 分类号: S852.612
• 字数: 5046字
• 语种: 中文

摘要

为探讨肠炎沙门菌非编码小RNA (non-coding small RNA) IsrE在转录后水平是否参与对fimA的调控作用，在大肠杆菌中构建并表达FimA重组蛋白，并对其培养条件进行优化，制备高纯度FimA重组蛋白。利用原核表达载体pET-28a（+）构建出能表达fimA的重组质粒，并分别对IPTG浓度、诱导温度和诱导时间等条件进行优化，以提高目的蛋白的产量和增大其可溶性，最后经Ni-NTA亲和层析分离纯化FimA重组蛋白。通过酶切、测序和Western blot鉴定分析，成功构建并表达肠炎沙门菌I型菌毛主要亚单位FimA，蛋白分子质量约为19.3 kDa，且主要以包涵体的形式表达，经Ni-NTA亲和层析纯化后的重组蛋白在SDS-PAGE中显示单一条带。本研究构建、表达并获得纯度较高的重组蛋白FimA，为进一步研究和验证肠炎沙门菌非编码sRNA IsrE是否在转录后水平参与对fimA的调控奠定了基础。