原核表达MurA蛋白并制备其多克隆抗体用于免疫磁珠快速检测单增李斯特菌

• 作者: 向军俭 李志清 李雨辰 童吉宇 闻一鸣
• 来源期刊: 微生物学通报
• 关键词: 单增李斯特菌 MurA 多克隆抗体 免疫磁珠
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 生物实验室
• 页码范围: 1234-1242
• 语种: 中文
• DOI: 10.13344/j.microbiol.china.130782

摘要

[目的]制备MurA多抗,结合免疫磁珠与选择平板进行单增李斯特菌的快速检测,建立单增李斯特菌的免疫磁珠快速检测方法.[方法]构建MurA的原核表达载体,转化大肠杆菌进行优化表达.镍柱纯化表达产物,质谱鉴定重组蛋白,再免疫小鼠,制备其多克隆抗体.用所获多抗制备免疫磁珠,建立单增李斯特菌免疫磁珠-选择性培养基检测方法,并对人工污染牛奶样品进行检测. [结果]在大肠杆菌中高效表达了分子量约为72 kD的可溶性融合蛋白,质谱鉴定其为MurA蛋白;免疫小鼠获得的抗血清效价达1:10 000,与伤寒沙门氏菌、副溶血弧菌、大肠杆菌及属内其它病原菌均无交叉;所建立的免疫磁珠-选择性培养基检测法可检出浓度为103 CFU/mL及以上的单增李斯特菌,仅与英诺克李斯特菌存在一定交叉反应;牛奶样品单次仅需9h增菌就能被检出,较常规增菌时间缩短39 h;检测限为0.4 CFU/mL. [结论]表达并纯化得到高纯度的单增李斯特菌MurA蛋白,制备的鼠源多克隆抗体亲和力高,特异性好;建立了快速检测单增李斯特菌的免疫磁珠联合选择性培养基法,在灵敏度不变的情况下,实现24 h内成功对牛奶样品的检测,较国标法减少42 h以上.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	向军俭	广东省分子免疫与抗体工程重点实验室暨南大学抗体工程研究中心	11	114	6.0	10.0
2	李志清	广东省分子免疫与抗体工程重点实验室暨南大学抗体工程研究中心	3	44	3.0	3.0
3	李雨辰	广东省分子免疫与抗体工程重点实验室暨南大学抗体工程研究中心	2	12	2.0	2.0
4	闻一鸣	广东省分子免疫与抗体工程重点实验室暨南大学抗体工程研究中心	4	63	4.0	4.0
5	童吉宇	广东省分子免疫与抗体工程重点实验室暨南大学抗体工程研究中心	3	47	3.0	3.0