过表达miR-19慢病毒载体的构建和鉴定

• 作者: 孙晓敏 肖东 鄢文 靳文
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: miR-19 RFP 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2014,（7）
• 所属期刊栏目: 实验研究论著
• 页码范围: 850-852,封4
• 分类号: R373.9
• 语种: 中文

摘要

目的 构建过表达miR-19a/19b(miR-19)基因的慢病毒载体pm19H2BmRFP.方法 依据miR-19(784 bp)的序列设计引物,以pMIG-miR-19a/19b为模板扩增目的片段miR-19,再经胶回收、酶切并纯化而获连接用目的片段.连接用pHIV-H2BmRFP载体采用内切酶Xba Ⅰ和HpaⅠ进行双酶切,获得粘性末端线性化片段并纯化.最后使用T4 DNA连接酶对纯化的线性化载体pHIV-H2BmRFP和miR-19片段进行定向连接,转化,次日挑选单菌落,提取质粒后行PCR和测序鉴定.所构建载体即为pm19H2BmRFP.参考文献方法进行慢病毒包装和确认慢病毒是否成功生产;过表达miR-19和RFP的慢病毒感染293T细胞及肺腺癌细胞株A549-Luc以建立相应病毒感染体系.结果 PCR及测序结果证实成功构建了pm19H2BmRFP,过表达miR-19的慢病毒上清感染A549-Luc和293T细胞48 h后,荧光显微镜下均可观察到红色荧光.结论 成功构建过表达miR-19基因的慢病毒载体pm19H2BmRFP,为后续研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙晓敏	南方医科大学中医药学院	59	483	13.0	19.0
2	靳文	广东省第二人民医院心血管二科	39	168	7.0	10.0
3	肖东	南方医科大学肿瘤研究所	29	117	5.0	10.0
4	鄢文	广东省第二人民医院肿瘤一科	12	31	4.0	5.0