口蹄疫病毒VP1蛋白诱导犊牛甲状腺初代细胞凋亡的鉴定

• 作者: 张淼涛 曹伟军 李营营 杨帆 毛箬青 郑海学
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 口蹄疫病毒 VP1蛋白 犊牛甲状腺初代细胞 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2014,（8）
• 页码范围: 838-845
• 页数: 8页
• 分类号: S852.659.6
• 语种: 中文

摘要

为了制备和培养犊牛甲状腺初代细胞(CTY),并检测口蹄疫病毒VP1蛋白对其诱导的凋亡情况,采用原代细胞培养方法,取初生犊牛甲状腺制备初代细胞并培养.采用RT-PCR方法扩增口蹄疫病毒VP1基因,再用限制性内切酶EcoR Ⅰ+XhoⅠ酶切后定向克隆到表达载体pCAGGS中,构建重组质粒pCAGGS-VP1,转染CTY,用Western-blot检测口蹄疫病毒VP1蛋白在犊牛甲状腺初代细胞中的表达情况;通过显微镜观察转染的CTY细胞状态、经AV-PI双染色、检测线粒体膜电位变化和Hoechst-33258荧光染色来检测细胞凋亡.结果显示,成功制备了犊牛甲状腺初代细胞,构建的重组质粒可以在犊牛甲状腺初代细胞中表达,通过几种方法均证明口蹄疫病毒VP1蛋白能够诱导犊牛甲状腺初代细胞的凋亡,细胞凋亡率比空载体对照组高约2倍.结果表明,口蹄疫病毒VP1蛋白能够诱导CTY的凋亡,这一结果为深入研究口蹄疫病毒VP1蛋白凋亡功能域和VP1诱导的凋亡途径奠定了基础.