圆红冬孢酵母新颖脂肪酸合酶的重组表达、纯化与活性检测

• 作者: 刘武军 张素芳 朱志伟 林心萍 赵宗保
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: 圆红冬孢酵母 脂肪酸合酶 过表达 纯化 酶活性
• 年，卷（期）: 2014,（9）
• 所属期刊栏目: 工业生物技术
• 页码范围: 1414-1423
• 语种: 中文
• DOI: 10.13345/j.cjb.130626

摘要

脂肪酸合酶(Fatty acid synthase,FAS)催化乙酰辅酶A和丙二酸单酰辅酶A反应生成脂肪酸,是油脂合成代谢途径中最重要的酶之一.在高产油脂的圆红冬孢酵母Rhodosporidium toruloides中发现了一种新颖的FAS,它含两个亚基,与其他物种的FAS相比,具有独特的结构域组成,尤其是含两个酰基载体蛋白(ACP)结构域.由于ACP在脂肪酸合成反应中起辅因子作用,推测多个ACP有利于提高FAS的催化活性,为研究该FAS的生物化学和结构特征,构建了表达FAS两个亚基的载体,并转化大肠杆菌Escherichia coli BL21 (DE3),含pET22b-FAS1和pET24-FAS2质粒的重组菌株ZWE06可同时高表达两个亚基,经硫酸铵沉淀、蔗糖密度梯度离心和阴离子交换层析纯化,得到的重组FAS比活力达到548 mU/mg.纯化的FAS复合物可用于后续酶动力学和蛋白结构研究,且表达与纯化方法的建立对研究其他ACP的功能具有参考价值.