可介导多药耐药的cfr基因的原核表达及多克隆抗体的制备

• 作者: 刘洋 吴聪明 左之才 钟洁 陈乐然
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: cfr基因 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体制备
• 年，卷（期）: 2014,（10）
• 页码范围: 1060-1065
• 页数: 6页
• 分类号: S852.61
• 语种: 中文

摘要

为建立监测Cfr蛋白的方法奠定基础,采用PCR方法扩增cfr基因,并克隆入pEasy-T载体;测序确认后克隆入pET-28a(+)载体,构建重组质粒pET-28a-cfr,然后转化入大肠杆菌BL21 (DE3)中并用IPTG诱导表达Cfr蛋白;用纯化的Cfr蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,并对抗体进行鉴定.结果显示,成功克隆了全长cfr基因,构建了重组质粒pET-28a-cfr,并诱导了Cfr蛋白表达以及制备了小鼠抗Cfr蛋白的多克隆抗体;Western-blot法鉴定该抗体可特异性识别重组蛋白Cfr;ELISA法测定抗体效价为1∶64 000.结果表明,用大肠杆菌BL21 (DE3)能够成功表达Cfr蛋白,并且获得了高特异性、高效价的小鼠抗Cfr蛋白的多克隆抗体.