真核表达载体pEGFP-N1-kin17的构建及其在Zmpste24-/-小鼠胚胎成纤维细胞内的表达

• 作者: 余磊 刘新光 崔红晶 郑慧玲 黄颖
• 来源期刊: 中国医药科学
• 学科: 医学
• 关键词: kin17 GFP Zmpste24 小鼠胚胎成纤维细胞
• 年，卷（期）: 2014,（13）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 34-37,127
• 页数: 5页
• 分类号: R346
• 字数: 3678字
• 语种: 中文

摘要

目的：构建人kin17基因真核表达载体pEGFP-N1-kin17，将载体转染至野生型及Zmpste24基因缺失的小鼠胚胎成纤维上皮细胞，荧光显微镜观察kin17蛋白表达情况。方法用高保真DNA 聚合酶，从pCMV-kin17载体中扩增获取人kin17 cDNA编码序列，将其克隆至pEGFP-N1载体中，经酶切、连接、转化后，挑取阳性克隆进行菌液进行PCR、菌液质粒双酶切及测序鉴定；将成功构建的GFP-kin17表达载体转染Zmpste24-/- MEFs，荧光显微镜观察kin17蛋白的核定位情况。结果 pEGFP-N1-kin17转化细菌克隆测序结果完全正确；将载体转入MEFs后，可以通过荧光显微镜观察到kin17蛋白的表达。结论成功构建GFP融合的kin17真核表达载体，该载体为kin17蛋白的研究提供工具。本实验中载体pEGFP-N1-kin17在野生型和Zmpste24-/- MEFs中均成功表达。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	崔红晶		15	72	4.0	8.0
3	郑慧玲		12	15	2.0	3.0
7	余磊		3	1	1.0	1.0
13	黄颖		1	0	0.0	0.0