黄瓜动蛋白特异肽段的原核表达和多克隆抗体制备

• 作者: 余宏军 刘晓林 张晓孟 杨学勇 王燕 蒋卫杰
• 来源期刊: 园艺学报
• 学科: 农学
• 关键词: 黄瓜 果实 动蛋白 肽段 原核表达
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1207-1217
• 分类号: S642.2
• 语种: 中文

摘要

以黄瓜果实总RNA为模板,通过RT-PCR获得了动蛋白基因CsKF和CsKF2的cDNA序列,进行测序,构建T-easy载体.SMART在线预测CsKF1和CsKF2均含有动蛋白(Kinesin)约340个氨基酸残基的马达区保守序列(moter domain).体外表达蛋白的马达区和非马达区,将带有His标签的CsKF1-N、CsKF2-C、CsKF 1-M、CsKF2-M融合蛋白通过E.coli BL21 (DE3)表达,摸索不同诱导条件下目的蛋白的表达和纯化.其中His-CsKF 1-N、His-CsKF2-C、His-CsKF1-M原核表达蛋白的分子量分别为25、30和40 kD,均以0.1 mmol.L-1 IPTG,22℃6h诱导表达效果最好.His-CsKF2-M原核表达蛋白的分子量约38kD,以18℃8h诱导表达效果最好.融合蛋白His-CsKF1-N和His-CsKF2-C经过亲和纯化后作为抗原,通过5轮免疫注射兔子后,取心脏血作为抗血清,通过AminoLink Plus kit试剂盒亲和纯化得到多克隆抗体anti-CsKF 1-N和anti-CsKF2-C.经过Western blot分析表明多克隆抗体具有特异性,可与抗原特异结合.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	余宏军	中国农业科学院蔬菜花卉研究所	117	1903	21.0	42.0
2	蒋卫杰	中国农业科学院蔬菜花卉研究所	127	2026	22.0	43.0
3	杨学勇	中国农业科学院蔬菜花卉研究所	9	97	4.0	9.0
4	王燕	中国农业科学院蔬菜花卉研究所	11	219	4.0	11.0
5	刘晓林	中国农业科学院蔬菜花卉研究所	6	11	1.0	3.0
6	张晓孟	中国农业科学院蔬菜花卉研究所	2	0	0.0	0.0