基于双启动引物特异性检测单核细胞增生李斯特氏菌的PCR方法

• 作者: 刘忠梅 刘新亮 张柏棋 徐义刚 李丹丹 李苏龙 魏冬旭
• 来源期刊: 食品工业科技
• 学科: 工学
• 关键词: 单核细胞增生李斯特氏菌 iap基因 DPO-PCR方法
• 年，卷（期）: 2014,（10）
• 所属期刊栏目: 分析检测
• 页码范围: 86-89
• 分类号: TS207.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2014.10.010

摘要

以单核细胞增生李斯特氏菌iap基因为靶基因,利用一新型PCR引物设计方法--双启动引物(Dual-priming oligonucleotide,DPO),建立了特异性检测单核细胞增生李斯特氏菌的DPO-PCR方法,测试了DPO-PCR方法退火温度不敏感性、特异性及灵敏度,并在实践检测中进行了初步应用.结果显示:该方法检测单核细胞增生李斯特氏菌的灵敏度为1.51×102CFU/mL;退火温度不敏感性测试中,与常规PCR引物相比,DPO引物在48～68℃退火温度范围内均能够高效率地扩增靶基因;特异性测试中,DPO-PCR方法能特异地检测出目标菌,与其他菌株无非特异性扩增反应,比常规PCR方法显示出更强的特异性.实践应用证明,利用DPO-PCR方法对130份样本进行检测,共计检出9份单核细胞增生李斯特氏菌阳性样本,经国标法(GB/T4789.30-2008)复检,两者检测结果一致,显示出良好的实用性,为单核细胞增生李斯特氏菌的快速准确检测提供了新方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐义刚	黑龙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心	33	254	9.0	13.0
2	刘忠梅	黑龙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心	20	113	7.0	8.0
3	李苏龙	黑龙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心	22	151	9.0	10.0
4	李丹丹	海南出入境检验检疫局检验检疫技术中心	41	185	8.0	10.0
5	魏冬旭	黑龙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心	18	138	7.0	11.0
6	刘新亮	黑龙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心	8	34	4.0	5.0
7	张柏棋		2	22	2.0	2.0