FimH1-156融合基因的构建及其原核蛋白表达与纯化

• 作者: 吴玉章 唐莎 尹仕伟 张晋宇 张莹 张静波 施维维 袁发焕 邹丽云
• 来源期刊: 重庆医学
• 关键词: Fim H1 -156 融合蛋白 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 论著?基础研究
• 页码范围: 589-591
• 页数: 3页
• 字数: 3203字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2014.05.029

摘要

目的：构建含有与溶酶体膜蛋白2（LAMP-2）P41-49完全同源序列的尿路致病性大肠杆菌（UPEC）Ⅰ型菌毛FimH1-156为目的基因的原核载体，表达并纯化FimH1-156融合蛋白。方法采用PCR克隆pPKL241质粒获取 FimH1-156基因，插入原核表达载体pET28a（＋）；将重组表达质粒转染感受态 E ．coli BL21（DE3），经IPTG诱导表达 FimH1-156融合蛋白，超声裂解细菌，Ni-NTA层析法进行纯化，聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析、蛋白免疫印迹法（Western blot）对其进行鉴定。结果成功构建表达载体，经对融合蛋白表达条件的优化，在IPTG 浓度为1 mmol/L ，诱导4 h目的蛋白表达量最高，主要以包涵体形式存在；Western blot证实该FimH1-156融合蛋白可与抗6× His单克隆抗体发生结合反应。结论成功克隆FimH1-156融合蛋白表达基因并构建至原核表达载体，获得了包涵体纯化的Fim H1-156融合蛋白，为下一步建立实验动物模型奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴玉章	第三军医大学全军免疫研究所	325	1583	17.0	22.0
2	邹丽云	第三军医大学全军免疫研究所	64	278	10.0	13.0
3	袁发焕	第三军医大学新桥医院肾内科	134	739	12.0	20.0
4	张晋宇	第三军医大学全军免疫研究所	10	31	3.0	5.0
5	张莹	第三军医大学新桥医院肾内科	43	285	9.0	15.0
6	唐莎	第三军医大学新桥医院肾内科	11	28	4.0	4.0
7	尹仕伟	第三军医大学新桥医院肾内科	7	18	3.0	4.0
8	施维维	第三军医大学新桥医院肾内科	3	7	1.0	2.0