腾冲嗜热厌氧菌耐热解旋酶Tte-uvrD的克隆表达及粗酶的初步应用

• 作者: 余以刚 章丽 肖性龙 黄秀丽
• 来源期刊: 食品工业科技
• 学科: 工学
• 关键词: 腾冲嗜热厌氧菌 Tte-uvrD 克隆表达 粗酶 tHDA
• 年，卷（期）: 2014,（12）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 226-229,235
• 分类号: TS207.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2014.12.041

摘要

以腾冲嗜热厌氧菌(Thermoanaerobacter tengconge ns is)基因组DNA为模版,通过PCR克隆编码解旋酶Tte-uvrD的基因tte-uvrd,将该基因插入原核表达载体pET-32a(+),构建重组表达载体pET-32a(+)-tte-uvrd,转入E.coli BL21中,经蓝白斑筛选和双酶切法筛选阳性重组转化子,挑取测序正确的单个阳性菌落,在IPTG诱导下表达出重组蛋白Tte-uvrD.诱导后的菌体经超声破碎和离心,上清液用硫酸铵沉淀法初步纯化,透析除盐,冻干复溶后得到粗酶液.用tHDA反应来验证Tte-uvrD粗酶液的活性,比较不同储存温度下粗酶液酶活保持的时间,并比较-20℃下储存两个月的粗酶液与商品化纯酶的tHDA反应灵敏度.结果表明,用本研究建立的克隆方法可成功克隆出耐热解旋酶Tte-uvrD,其粗酶液能用于tHDA反应,说明粗酶液具有解旋活性;粗酶液在-20℃下第80d酶活仍能保持稳定,4℃下则只能保持酶活约一周;-20℃下储存两个月的粗酶液能达到与商品化纯酶相当的灵敏度.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	余以刚	华南理工大学轻工与食品学院	105	1163	18.0	30.0
2	肖性龙	华南理工大学轻工与食品学院	35	197	9.0	12.0
3	黄秀丽		16	62	5.0	7.0
4	章丽	华南理工大学轻工与食品学院	1	1	1.0	1.0