实时荧光定量PCR构建BIM基因表达标准品质粒和标准曲线

• 作者: 付文卓 吴英婷 武文琦 潘博 王利勇 邹林樾 隋雷鸣
• 来源期刊: 黑龙江畜牧兽医（上半月）
• 学科: 农学
• 关键词: BIM 实时荧光定量PCR 标准品质粒 标准曲线
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 39-42,213
• 页数: 5页
• 分类号: S813.3|Q754
• 语种: 中文

摘要

为了能够快速、准确定量BIM基因的mRNA,试验构建了小鼠BIM基因的标准品质粒和标准曲线,根据GenBank中鼠基因编码区保守序列,设计特异性引物,从N2a细胞中提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增该基因122 bp的核苷酸片段,经纯化、连接和转化后,提取质粒并进行酶切、测序鉴定,然后将阳性重组质粒10倍递减稀释作为标准模板,通过SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法,建立了BIM标准曲线及直线回归方程.结果表明:产物熔解曲线峰值单一,引物特异性高;标准曲线相关系数r2=0.998,线性关系好.说明成功构建了目的基因BIM的标准品质粒和标准曲线.