腺病毒介导的双荧光素酶报告系统的构建及其应用

• 作者: 刘品一 吕赛群 吴孟超 吴红平 徐增辉 施军霞 李振海 李林芳 金华君
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 腺病毒 双荧光素酶报告系统 启动子 CCAU
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 研究快报
• 页码范围: 420-426
• 分类号: Q939|Q4|Q782
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2015.04.002

摘要

目的:构建腺病毒介导的双荧光素酶报告系统,并利用其筛选一种广谱高活性启动子.方法:将待检测启动子控制的萤火虫荧光素酶(Fluc)基因表达框插入腺病毒E1区,CMV启动子控制的海肾荧光素酶(Rluc)基因表达框插入E3区作为内参,构建腺病毒介导的双荧光素酶报告系统.检测不同病毒感染量条件下测得的启动子活性数据差异、组内差异,难转染细胞内的转染情况,分析该系统的操作简便性、稳定可靠性.应用该系统检测常用启动子CAG、CASI及新启动子CCAU在一系列细胞内的活性,从中筛选出一种广谱高活性启动子.结果:成功构建了腺病毒介导的双荧光素酶报告系统;不同MOI值下测得的各启动子相对活性值无显著差异(P＞0.05);在所实验的细胞内均能有效且准确地测定各启动子的活性,且复孔间方差小;CCAU在所实验的9株细胞中的表达活性显著(P＜0.05)或极显著地(P＜0.01)高于CASI以及CAG的表达活性.结论:构建获得的腺病毒介导双荧光素酶报告系统操作简便、稳定可靠、通用性强,可作为启动子活性筛选的一种新方法;利用该系统筛选获得了一种新的广谱高活性启动子CCAU.