利用GST融合蛋白表达系统表达与纯化人N-Ras蛋白

• 作者: 冯滢滢 叶棋浓 张云静 张立 张蓉 徐小洁 李玲 梁迎春 王涛 纪贝贝 郭靖
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 人N-ras蛋白 小G蛋白 原核表达 纯化
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 497-500
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 2922字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2015.04.011

摘要

目的：克隆人N-ras蛋白全长编码区基因，获得其原核表达产物，并对融合蛋白进行纯化。方法：采用PCR技术从人乳腺文库中扩增出人N-ras蛋白全长编码区基因，将其克隆到pGEX-KG载体中，在大肠杆菌Rossate中表达后，利用GST-Sepharose 4B亲和珠对原核表达产物进行纯化，SDS-PAGE鉴定表达与纯化产物。结果：从人乳腺文库中扩增获得约600 bp的DNA片段，并克隆至pGEX-KG载体上，经测序与目的序列完全一致；在大肠杆菌Rossate中诱导表达出相对分子质量约47×103的目的蛋白；纯化后，经鉴定获得了纯度较高的重组蛋白GST-N-Ras。结论：获得了重组蛋白GST-N-ras，为后续深入研究Ras基因与其他癌基因、抑癌基因的相互作用奠定了基础。