幽门螺杆菌黏附素HpaA重组蛋白的表达、纯化及晶体生长

• 作者: 倪兵 刘东 刘威 吴玉章 李海波 王书峰 章金勇 郭玲 马博
• 来源期刊: 免疫学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 幽门螺杆菌 HpaA 表达 纯化 晶体生长
• 年，卷（期）: 2015,（11）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 986-990
• 页数: 5页
• 分类号: Q71
• 语种: 中文
• DOI: 10.13431/j.cnki.immunol.j.20150208

摘要

目的 构建幽门螺杆菌黏附素HpaA的原核表达载体,并用纯化的重组HpaA蛋白进行晶体培养,为其三维结构解析、基于结构的HpaA抗原表位分析和黏附拮抗剂研究奠定基础.方法 用生物信息学方法分析HpaA蛋白序列二级结构并预测跨膜区,利用PCR技术扩增幽门螺杆菌标准株NCTC 26695编码HpaA蛋白的hp0797基因非跨膜区片段,构建重组质粒并pET22b(+)-rHpaA,在大肠杆菌BL21(DE3)中IPTG诱导表达重组蛋白,经Ni离子亲和层析、阴离子交换层析、凝胶过滤层析纯化蛋白并分析其聚集状态.用Hampton Research结晶试剂盒搜索结晶条件,并系统优化,在上海同步辐射光源进行衍射实验.结果 成功构建了重组质粒pET22b(+)-rHpaA,并在大肠杆菌BL21(DE3)中可溶性表达;重组HpaA蛋白在溶液中以二聚体形式存在,SDS-PAGE分析单体相对分子质量约24000,HPLC分析纯度达95％;培养出晶形较好的重组HpaA蛋白单晶,大小约70 μm×30 μm× 20 μm,衍射分辨率2.03 A.结论 利用经典的蛋白质表达、纯化技术和晶体培养技术,获得了衍射能力较强的重组HpaA蛋白单晶,为其三维结构解析和基于结构的幽门螺杆菌疫苗研究提供了重要基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴玉章		325	1583	17.0	22.0
2	章金勇		12	38	4.0	5.0
3	倪兵		71	225	8.0	11.0
4	李海波		12	43	4.0	6.0
5	郭玲		13	44	4.0	6.0
6	刘威		9	24	3.0	4.0
7	刘东		9	33	3.0	5.0
8	马博		2	0	0.0	0.0
9	王书峰		7	32	3.0	5.0