人hDlg蛋白PDZ结构域的克隆及原核表达与纯化

• 作者: 党育平 刘玮 李强 袁小英
• 来源期刊: 实用皮肤病学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人乳头瘤病毒 hDlg PDZ结构域 原核表达
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 415-418
• 页数: 4页
• 分类号: R752
• 字数: 3019字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11786/sypfbxzz.1674-1293.20150604

摘要

目的 探讨人果蝇肿瘤抑制蛋白hDlg的PDZ结构域在大肠杆菌中的表达与纯化.方法 从HeLa细胞中设计引物克隆含有hDlg PDZ cDNA片段后进行第二轮扩增,并连接至T载体进行测序鉴定,EcoRⅠ和Xho Ⅰ双酶切后连接至pGEX-6p-l原核表达载体.转化BL21大肠杆菌后37℃诱导表达.结果 测序和双酶切鉴定hDlg的PDZ结构域被成功克隆至pGEX-6p-1原核表达载体.37℃诱导表达后,大部分GST-PDZ融合蛋白以包涵体的形式存在,部分存在于细菌裂解上清液中.16℃诱导表达后,无法检测到目的蛋白的表达.通过GST-beads结合的方式对细菌裂解液进行纯化,可溶性GST-PDZ的蛋白量可以显著提高.结论 通过GST-PDZ诱导表达,再通过GST-beads结合纯化的方式成功表达可溶性的hHlg PDZ结构域.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘玮	空军总医院皮肤科	52	246	9.0	13.0
2	袁小英	空军总医院皮肤科	21	48	3.0	5.0
3	党育平	空军总医院皮肤科	19	115	7.0	10.0
4	李强	空军总医院皮肤科	11	34	3.0	5.0