融合蛋白GST-反式转录激活因子蛋白-增强型绿色荧光蛋白表达及对血迷路屏障作用

• 作者: 张伟 张罗 李颖 杜延顺 杨军
• 来源期刊: 中国耳鼻咽喉头颈外科
• 关键词: 重组融合蛋白质类 迷路 血迷路屏障 反式转录激活因子蛋白 增强型绿色荧光蛋白
• 年，卷（期）: 2015,（11）
• 所属期刊栏目: 论 著
• 页码范围: 578-580
• 页数: 3页
• 字数: 2423字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16066/j.1672-7002.2015.11.011

摘要

目的：表达并纯化融合蛋白GST-反式转录激活因子蛋白-增强型绿色荧光蛋白（GST-transactivator of transcription- enhanced green fluorescence protein，GST-TAT-EGFP），并研究其是否能跨越血迷路屏障（blood labyrinth barrir，BLB）进入内耳。方法用基因重组技术将编码TAT蛋白11个氨基酸短肽基因和EGFP基因重组，分别构建pGEX-6p-1-TAT-EGFP和pGEX-6p-1-EGFP表达载体，将载体分别转化大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导表达融合蛋白，用GST树脂柱亲和层析纯化融合蛋白。将10只豚鼠随机分为两组，分别肌肉注射GST-EGFP和GST-TAT-EGFP；2～4 h后豚鼠经麻醉、断头取耳蜗等组织。用2%多聚甲醛固定，耳蜗经10%EDTA（pH7.4）脱钙、OCT包埋，制备颞骨冰冻切片，采用免疫组化技术和荧光显微镜技术观察TAT短肽是否可以携带分子量55 kD的GST-EGFP跨越BLB进入内耳。结果 GST-TAT-EGFP进入内耳后主要分布于血管纹和螺旋器，而对照组EGFP不能进入内耳。结论短肽TAT可转导大分子蛋白通过BLB进入内耳，为外源性蛋白药物治疗内耳疾病提供新手段。