抗siRNA的GFP-Plk1同义突变表达载体及其稳定细胞系的构建

• 作者: 于楠 刘萱 曹诚 李伟 李峰生 李平 江其生
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: Plk1 抗siRNA 同义突变 稳定细胞系
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 207-210
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3250字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2015.02.012

摘要

目的：构建GFP-Plk1同义突变表达载体及其稳定转染细胞系。方法：设计Polo样激酶1（Plk1）siRNA序列及相对应的同义突变引物，并利用二次PCR方法扩增Plk1基因，定向克隆到pRex-EGFP-IRES-Hygro载体中，构建pRex-EGFP-rPlk1-IRES-Hygro表达载体；利用逆转录病毒感染的方法，构建HeLa/GFP-rPlk1稳定细胞系；利用免疫印迹及激光共聚焦显微镜，验证Plk1 siRNA的干扰效果及稳定细胞系的构建。结果：双酶切鉴定和测序结果表明构建的pRex-EGFP-rPlk1-IRES-Hygro正确；免疫印迹实验证明Plk1 siRNA序列可以有效抑制HeLa/GFP-rPlk1细胞中内源性Plk1蛋白的表达，但不能干扰掉外源GFP-rPlk1蛋白；在荧光共聚焦显微镜下，观察到有丝分裂的前中期和末期，GFP-rPlk1分别定位于着丝粒和中间体上。结论：构建了Plk1同义突变表达载体pRex-EGFP-rPlk1-IRES-Hygro和HeLa/GFP-rPlk1稳定细胞系，为下一步研究Plk1在有丝分裂期的调控机制提供了模型。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曹诚	军事医学科学院生物工程研究所	112	536	10.0	19.0
2	李平	军事医学科学院生物工程研究所	63	162	6.0	9.0
3	李峰生	第二炮兵总医院核与辐射损伤实验室	26	72	4.0	7.0
4	刘萱	军事医学科学院生物工程研究所	42	105	6.0	8.0
5	江其生	第二炮兵总医院核与辐射损伤实验室	63	285	10.0	14.0
6	李伟	军事医学科学院生物工程研究所	47	252	9.0	14.0
10	于楠	第二炮兵总医院核与辐射损伤实验室	3	16	2.0	3.0