利用CRISPR/Cas9技术构建敲除MEIS2基因的HEK293T人胚肾细胞系

• 作者: 刘翠翠 刘鑫 卢利莎 杨亦青 王洪涛 王钰 白杨 苏培 高洁
• 来源期刊: 中国细胞生物学学报
• 关键词: MEIS2 CRISPR/Cas9系统 基因敲除
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 535-541
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.11844/cjcb.2015.04.0020

摘要

CRISPR/Cas9系统作为一种新型的基因组编辑技术,利用人工设计的向导RNA(singleguide RNA,sgRNA)介导外源表达的Cas9蛋白与基因组靶点特异性结合以实现对基因组DNA的特异性切割,切割后的基因组DNA通过非同源末端连接或同源重组的方式进行修复,从而实现基因的敲除、敲入等.MEIS2属于一类高度保守的同源盒转录因子MEIS家族,研究发现,MEIS2广泛参与胚胎的早期发育及肿瘤的发生发展,但其发挥作用的机制目前还不是很清楚.该研究针对MEIS2基因作用的功能域,设计两个靶向MEIS2基因Exon3和Exon8的sgRNA,通过SURVEYOR分析及Western blot检测,确认了所设计sgRNA的有效性.进一步通过细胞分选及Western blot检测筛选出稳定敲除MEIS2基因的HEK293T细胞株.最后,通过序列测定确认MEIS2发生了移码突变.综上所述,该研究利用CRISPR/Cas9技术成功建立了完全敲除MEIS2的HEK293T细胞株,为研究MEIS2的功能和作用机制提供了有效工具.