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摘要:
CRISPR/Cas9系统作为一种新型的基因组编辑技术,利用人工设计的向导RNA(singleguide RNA,sgRNA)介导外源表达的Cas9蛋白与基因组靶点特异性结合以实现对基因组DNA的特异性切割,切割后的基因组DNA通过非同源末端连接或同源重组的方式进行修复,从而实现基因的敲除、敲入等.MEIS2属于一类高度保守的同源盒转录因子MEIS家族,研究发现,MEIS2广泛参与胚胎的早期发育及肿瘤的发生发展,但其发挥作用的机制目前还不是很清楚.该研究针对MEIS2基因作用的功能域,设计两个靶向MEIS2基因Exon3和Exon8的sgRNA,通过SURVEYOR分析及Western blot检测,确认了所设计sgRNA的有效性.进一步通过细胞分选及Western blot检测筛选出稳定敲除MEIS2基因的HEK293T细胞株.最后,通过序列测定确认MEIS2发生了移码突变.综上所述,该研究利用CRISPR/Cas9技术成功建立了完全敲除MEIS2的HEK293T细胞株,为研究MEIS2的功能和作用机制提供了有效工具.
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文献信息
篇名 利用CRISPR/Cas9技术构建敲除MEIS2基因的HEK293T人胚肾细胞系
来源期刊 中国细胞生物学学报 学科
关键词 MEIS2 CRISPR/Cas9系统 基因敲除
年,卷(期) 2015,(4) 所属期刊栏目 技术与方法
研究方向 页码范围 535-541
页数 7页 分类号
字数 语种 中文
DOI 10.11844/cjcb.2015.04.0020
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研究主题发展历程
节点文献
MEIS2
CRISPR/Cas9系统
基因敲除
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
中国细胞生物学学报
月刊
1674-7666
31-2035/Q
大16开
上海岳阳路319号31B楼408室
4-296
1979
chi
出版文献量(篇)
3930
总下载数(次)
24
相关基金
国家自然科学基金
英文译名:the National Natural Science Foundation of China
官方网址:http://www.nsfc.gov.cn/
项目类型:青年科学基金项目(面上项目)
学科类型:数理科学
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