RPL5蛋白重组质粒的构建、表达及细胞内定位

• 作者: 万志丹 李冬秀 谭家余 钟裕恒 陈敬林 黄湘
• 来源期刊: 中国卫生检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 核糖体蛋白L5 重组质粒 载体构建 细胞定位
• 年，卷（期）: 2015,（24）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 4180-4182
• 页数: 3页
• 分类号: R392.11
• 语种: 中文

摘要

目的 构建重组质粒载体pcDNA3.1-RPL5,观察核糖体蛋白15(RPL5)在293T、HepG2和SMMC7721细胞株中的定位和表达情况.方法 使用基因合成法合成RPL5基因,在其N端添加Kozak序列及His标签序列,扩增后的目的基因双酶切后连接至pcDNA3.1载体的BamH Ⅰ和NotⅠ位点之间,从而构建重组质粒pcDNA3.1-RPL5.将后者转化DH5α大肠杆菌,培养后挑取阳性克隆子进行质粒抽提电泳、测序比对等鉴定.采用脂质体法将鉴定正确的重组质粒转染至293T、HepG2和SMMC7721细胞株,激光共聚焦显微镜观察RPL5在此3种细胞中的表达和定位情况.结果 重组质粒pcDNA3.1-RPL5经酶切电泳及DNA测序比对证实,目的基因RPL5的序列完全正确,重组质粒载体构建成功.激光共聚焦观察发现RPL5主要表达于293T、HepG2和SMMC7721细胞的胞质中.结论 成功构建pcDNA3.1-RPL5融合基因并在293T、HepG2和SMMC7721细胞中表达,证实RPL5主要表达在真核细胞的细胞质中,为进一步探讨RPL5的生物学功能奠定了基础.