人Notch2受体胞内区基因N2ICD的原核表达、纯化和鉴定

• 作者: 叶健斌 宁云山 宁立军 李佩婷 李妍 李飞 胡冰心 邱晓媚 陈中标
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: Notch2 N2ICD 克隆 原核表达 纯化 鉴定
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 335-340
• 页数: 6页
• 分类号: Q291
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2016.04.0058

摘要

[目的]构建含Notch2胞内区基因N2ICD的原核重组质粒,并在E.coli中表达.[方法]根据GenBank上N2ICD基因序列设计引物,用PCR从真核重组质粒pCMV-Tag4/N2ICD中扩增目的基因,克隆至携带GST标签的pGEX-4T-1原核表达载体中并转化E.coli BL21.异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,收集菌体经反复冻融、溶菌酶破菌、超声破碎后,通过SDS-PAGE电泳检测目的蛋白的表达形式,表达产物经谷胱甘肽琼脂糖树脂glutathione sepharose 4B纯化并经Western Blot鉴定.[结果]PCR获取了目的基因人N2ICD,并成功构建了重组表达质粒pGEX-4T-1/N2ICD,目的基因在E.coli中成功表达并以部分可溶性形式表达在上清中,纯化后经Western Blot鉴定表达产物分子量在110kDa.[结论]重组N2ICD在E.coli中成功获得可溶性表达,为研究Notch2受体在细胞信号转导巾的作用奠定了基础.