Spag6L基因真核表达质粒的构建及细胞内的蛋白表达与定位

• 作者: 双超凡 唐啸 张志兵 张玲 石玉琴 芦帷 闵洁
• 来源期刊: 武汉大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: Spag6L基因 精子发生 质粒构建 蛋白表达 细胞定位
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 技术与方法学研究
• 页码范围: 742-747,760
• 分类号: R34
• 语种: 中文
• DOI: 10.14188/j.1671-8852.2016.05.012

摘要

目的:构建小鼠Spag6L基因真核表达质粒,并研究其在细胞内的表达与定位.方法:以小鼠睾丸cD-NA基因文库为模版,PCR扩增Spag6L基因全长序列,测序正确后亚克隆至pEGFP-N2和pcDNA3真核表达载体中并酶切鉴定,将构建成功的重组表达质粒转染至COS-7与CHO细胞中,Western blot法检测COS-7细胞中SPAG6L蛋白表达,激光共聚焦扫描显微镜观察SPAG6L蛋白在CHO细胞内的定位.结果:重组质粒pEGFP-Spag6L和pcDNA3-Spag6L经双酶切后产生的1.5 kb的目的插入片段,经测序证实与Spag6L基因一致.GFP-SPAG6L融合蛋白分子质量为82 kU,SPAG6L蛋白分子质量为56 kU.SPAG6L蛋白在CHO细胞中主要定位于细胞质,以微管和囊泡表达为主.结论:构建的pEGFP-Spag6L和pcDNA3-Spag6L真核表达质粒成功,为进一步探究Spag6L基因与Spag6基因的关系以及Spag6L基因在精子发生中的功能与作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张玲	武汉科技大学医学院公共卫生学院	70	310	10.0	15.0
2	石玉琴	武汉科技大学医学院公共卫生学院	29	94	4.0	9.0
3	唐啸	武汉科技大学医学院公共卫生学院	14	72	5.0	8.0
4	张志兵	武汉科技大学医学院公共卫生学院	8	21	2.0	4.0
6	芦帷	武汉科技大学医学院公共卫生学院	2	0	0.0	0.0
7	双超凡	武汉科技大学医学院公共卫生学院	1	0	0.0	0.0
8	闵洁	武汉科技大学医学院公共卫生学院	1	0	0.0	0.0