皱纹盘鲍Hdh－MMP－1基因cDNA的克隆及原核表达

• 作者: 刘光明 曹敏杰 杜翠红 段雪昆 胡健健 蔡秋凤
• 来源期刊: 集美大学学报（自然科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 皱纹盘鲍 基质金属蛋白酶 cDNA克隆 生物信息学 原核表达
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 水产、食品与生物技术
• 页码范围: 321-329
• 页数: 9页
• 分类号: Q785|S917.4
• 字数: 6852字
• 语种: 中文

摘要

利用同源克隆方法和cDNA末端快速扩增（RACE）技术，从皱纹盘鲍（Haliotis discus hannai）肌肉组织中克隆得到基质金属蛋白酶－1基因（Hdh－MMP－1） cDNA全长序列（GenBank登录号： KR537291）。结果表明， Hdh－MMP－1 cDNA全长2136 bp，其中ORF长度为1551 bp，编码区含有516个氨基酸残基，预测其分子质量为58?94 ku，理论等电点为5?99。Hdh－MMP－1具有MMPs家族典型的N－端前肽区、催化区、铰链区和C－端类血红素结合区。利用SOPMA和SWISS－MODEL软件对该基因编码蛋白质高级结构进行了预测分析。氨基酸序列相似性结果显示， Hdh－MMP－1不仅与多种生物MMP－1基因具有序列相似性，且与某些软体动物和虫类的MMP－14及MMP－19也具有序列相似性。多序列比对结果显示， Hdh－MMP－1与红螺鲍、杂色鲍、美洲牡蛎的MMP－1相似性分别为95?29％、82?35％、38?85％。随后，构建了表达载体pET28a－catMMP－1，利用大肠杆菌原核表达系统，在大肠杆菌BL21（DE3）中成功对该蛋白质催化区进行异源表达。