人源性Rab32荧光融合蛋白表达载体的构建及鉴定

• 作者: 张彩娥 张艳红 李宏文 邓云华
• 来源期刊: 新乡医学院学报
• 学科: 生物学
• 关键词: Rab32 融合蛋白 表达载体 细胞定位 黑素代谢
• 年，卷（期）: 2016,（9）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 745-747,751
• 分类号: Q257
• 语种: 中文
• DOI: 10.7683/xxyxyxb.2016.09.001

摘要

目的 构建人源性Rab32荧光融合蛋白表达载体pEGFP-Rab32,并观察Rab32在人黑素细胞瘤细胞系A375中细胞定位情况.方法 收集并提取A375细胞中的总RNA,反转录成cDNA,以特异性引物扩增Rab32片段,经XhoI和KpnI双酶切聚合酶链反应(PCR)产物和pEGFP-C3表达载体,酶切产物经胶回收、连接后转化至感受态大肠杆菌DH5a中,挑取单克隆菌落进行菌液PCR鉴定、酶切鉴定和测序分析,以确定表达载体构建正确.将构建的重组质粒转染A375细胞,Western blot检测细胞中Rab32表达水平,激光共聚焦显微镜观察其细胞定位.结果 pEGFP-Rab32重组质粒经菌落PCR、双酶切和测序鉴定构建正确,转染A375细胞后,Western blot可检测出细胞中pEGFP-Rab32融合蛋白的表达,激光共聚焦显微镜观察到Rab32定位于细胞质中,且大量聚集于细胞核周围.结论 pEGFP-Rab32融合蛋白表达载体成功构建,并观察了Rab32在细胞中的定位,为进一步研究Rab32在黑素代谢中的作用奠定了良好的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张彩娥	华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉科	16	36	3.0	5.0
2	邓云华	华中科技大学同济医学院附属同济医院皮肤科	44	218	8.0	13.0
3	张艳红	华中科技大学同济医学院附属同济医院皮肤科	9	25	3.0	4.0
4	李宏文	华中科技大学同济医学院附属同济医院皮肤科	6	4	1.0	1.0