猪转录因子Nanog高效表达、多克隆抗体制备及其应用

• 作者: 刘晓鹏 崔怡 王传振 王华岩
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 猪 Nanog 干细胞 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 35-43
• 分类号: Q786
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2016.01.005

摘要

多能转录因子Nanog可维持干细胞的自我更新和多向分化潜能.为深入研究猪(Sus scrofa)Nanog在多能性调控网络的作用,本研究制备了鼠抗猪源Nanog多克隆抗体.首先,从猪肾脏中克隆Nanog基因CDS,再将CDS连接到pET32a质粒上,构建重组表达载体pET32a-Nanog.将重组载体转化大肠杆菌(Escherichia coli) Rosetta (DE3),经异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-d-thiogalactoside,IPTG)诱导表达,优化最佳诱导时间、温度和IPTG浓度等表达条件,获得分子量为57 kD的Nanog重组蛋白.将纯化的Nanog蛋白,免疫C57BL/6小鼠(Mus musculus),6周后获得阳性抗血清,通过Western blot和免疫荧光检测其抗体效价及其特异性.结果显示,在28℃、8 mmol/L IPTG、诱导2.5 h的条件下,可获得高效Nanog重组表达;制备的鼠抗猪Nanog多克隆抗体能特异性识别猪诱导多能干细胞表达的Nanog蛋白.研究结果为猪多能性干细胞的研究提供了有力工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王华岩	西北农林科技大学动物医学院	21	67	5.0	7.0
2	刘晓鹏	西北农林科技大学动物医学院	3	11	2.0	3.0
3	王传振	西北农林科技大学动物医学院	1	6	1.0	1.0
4	崔怡	西北农林科技大学动物医学院	1	6	1.0	1.0