Microbacterium sp.OU01壳聚糖酶Glu51和Asp69定点突变对酶活性的影响

• 作者: 严翠 孙玉英 张继泉 王淑军 赵宏 赵斌元
• 来源期刊: 食品工业科技
• 学科: 工学
• 关键词: 壳聚糖酶 定点突变 比活力 必需氨基酸
• 年，卷（期）: 2016,（16）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 167-171,177
• 分类号: TS201.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2016.16.025

摘要

为确定Microbacterium sp.OU01壳聚糖酶特定氨基酸与酶活性间的关系,以含壳聚糖酶基因的pCT7-CHISP6H-mMschito质粒为模板,利用反向PCR的方法对壳聚糖酶两个可能的酶活性位点Glu51(突变成Gln51)和Asp69(突变成Asn69)进行突变,从而构建了两个单位点突变,突变质粒分别转化至Escherichia coli BL21(DE3)并经IPTG诱导表达,测定突变前后酶的比活性,突变酶(Asp69→Asn69)比活力与野生型相比几乎不变,而突变酶(Glu51→Gln51)比活力大约为野生型的10％.通过测定动力学常数发现,突变酶和天然酶Km几乎没有很明显的变化,但是突变酶(Glu51→Gln51)的Vmax与上述两种酶的Vmax相比有很明显的变化.采用DNA Star和Deep view分析软件,预测突变前后壳聚糖酶的二级结构和三级结构,结果表明,Microbacterium sp.OU01壳聚糖酶Glu51极有可能是维持酶的催化活力的必需氨基酸,它的突变可能导致酶蛋白二级结构组件及氢键网络的改变,从而导致酶活力的丧失.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙玉英	淮海工学院海洋学院	14	55	4.0	7.0
3	张继泉	中国科学院海洋研究所	18	104	6.0	9.0
4	王淑军		20	110	5.0	10.0
5	严翠	淮海工学院海洋学院	3	1	1.0	1.0
8	赵宏		1	0	0.0	0.0
9	赵斌元		1	0	0.0	0.0