羊口疮病毒119蛋白表达、纯化和多克隆抗体的制备

• 作者: 梁婉菲 梁振明 罗树红 郝文波 陈慧芹 陈瑜 高其庆
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 羊口疮病毒 ORFV119 纯化 多克隆抗体 中和实验
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 112-116,173
• 页数: 6页
• 分类号: Q784
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2017.02.0019

摘要

[目的]克隆表达羊口疮病毒ORFV119蛋白,以纯化重组蛋白为免疫原制备鼠多克隆抗体,并鉴定抗体的特性.[方法] PCR扩增RFV119基因,克隆入原核表达载体pET-28a(+)中构建重组质粒pET28a-119.经双酶切和测序正确后,转化感受态大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定融合蛋白表达情况.表达产物进行超声破碎和Ni柱纯化,之后目的蛋白免疫BALB/c小鼠,制备ORFV119多克隆抗体并对其通过中和实验进行鉴定.[结果]成功构建重组质粒pET28a-119,在大肠杆菌BL21中ORFV119融合蛋白以部分可溶形式表达.可溶性目的蛋白纯化后作为免疫原制备鼠多克隆抗体,抗体效价达1∶12 800,中和实验显示该多抗具有保护作用,可减轻宿主细胞在病毒感染时的病变效应(中和效价66 ND50/mL).[结论]成功诱导表达、纯化ORFV119蛋白并制备其多克隆抗体,为深入研究ORFV感染、发病机理及羊口疮疾病的临床诊断奠定基础.