Zera标签蛋白微粒在本氏烟中的表达及纯化

• 作者: 丁向真 吴乐乐 徐丽 李志英 王盛
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: Zera标签 蛋白微粒 本氏烟 密度梯度 蔗糖垫
• 年，卷（期）: 2017,（8）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 1278-1288
• 页数: 11页
• 分类号: S-3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2017.08.008

摘要

Zera标签融合蛋白可以在植物叶片细胞中表达并形成蛋白质微粒且形成的微粒可以激发受体动物的免疫反应,推测Zera标签作为亚单位蛋白疫苗生物载体具有一定的可行性和潜力.为了验证这一假说,采用基因体外合成技术和亚克隆技术,构建植物二元表达载体pJ Zera-GFP,以农杆菌浸润法(Agroinfiltration)接种受体植物本氏烟(Nicotiana benthamiana).通过对Zera标签融合的报告基因绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)的荧光观察,并辅以十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和Western blot测定,对Zera标签融合蛋白微粒在植物中的表达情况和表达产物的特点进行了观察和分析,并初步建立起了相关的简易分离纯化技术.受体农杆菌菌株的比较结果表明,EHA105比GV3101更适合作为pJ Zera-GFP载体的农杆菌浸润法宿主菌株.同时发现,Zera-GFP融合蛋白以蛋白质微粒团块的形式存在于宿主细胞中,且对本氏烟细胞没有明显的细胞毒性.进一步观察烟草叶片细胞中Zera-GFP蛋白微粒的形态特征发现,叶片细胞中的微粒团块是由大小不均一、边缘轮廓清晰的近圆形小球组成.小球微粒直径范围为0.5～2.5 μm之间,球体彼此靠近,紧密的聚集在一起.从Zera标签形成微粒的粒径大小、表面形态、均匀程度和抗原含量等因素分析,认为表达的微粒具有成为亚单位疫苗生物载体的潜力.采用蔗糖密度梯度离心和垫层离心对Zera-GFP微粒进行了初步的纯化.实验结果显示,两种离心技术均可以从接种后的烟草叶片中纯化获得大量的Zera-GFP蛋白微粒,60％蔗糖垫层相对更适合作为Zera标签蛋白微粒的初步纯化技术.同时根据相关研究结果推测,Zeta标签蛋白微粒在受体植物细胞内的形成过程是一个从可溶到聚集的动态演变过程.研究结果为基于Zera标签的新型微粒疫苗的研究奠定了理论和实践基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	丁向真	宁夏大学生命科学学院	16	114	6.0	10.0
2	李志英	宁夏大学生命科学学院	15	18	2.0	3.0
4	王盛	宁夏大学生命科学学院	18	57	4.0	7.0
10	徐丽	宁夏大学生命科学学院	1	1	1.0	1.0
11	吴乐乐	宁夏大学生命科学学院	1	1	1.0	1.0