核转录因子红细胞系相关因子-2干扰质粒构建及鉴定

• 作者: 李杰 汤武装
• 来源期刊: 临床神经病学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 核转录因子红细胞系相关因子-2 RNA干扰 BV2细胞
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 120-123
• 页数: 4页
• 分类号: R363
• 字数: 2567字
• 语种: 中文

摘要

目的 设计及构建小鼠核转录因子红细胞系相关因子-2(Nrf2)基因的干扰质粒,并筛选出效果最好的干扰质粒.方法 设计3组针对Nrf2基因的核糖核酸干扰(RNAi)序列,应用基因重组技术克隆入载体中构建短发夹RNA(shRNA),分别为shRNA1、shRNA2及shRNA3,通过基因测序鉴定,经Lipofectamine 2000转染至BV2细胞,实时PCR检测Nrf2 mRNA的表达,Western Blot法检测Nrf2蛋白的表达.结果 测序表明,克隆入载体中的Nrf2干扰序列及读码框完全正确,实时PCR及Western Blot显示shRNA3干扰效果最强.结论 成功构建小鼠Nrf2的有效干扰质粒,为Nrf2信号通路在脑卒中领域的功能研究奠定了基础.