鲍曼不动杆菌MsrA蛋白原核表达载体的构建、纯化及氧化应激条件下的表达

• 作者: 肖非 谭潇
• 来源期刊: 微生物学免疫学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 鲍曼不动杆菌 甲硫氨酸亚砜还原酶A 原核表达 蛋白纯化 氧化应激
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 32-35
• 页数: 4页
• 分类号: R318
• 字数: 2883字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13309/j.cnki.pmi.2017.01.007

摘要

目的 以鲍曼不动杆菌甲硫氨酸亚砜还原酶A(methionine sulfoxide reductase A, MsrA)构建pET28a-MsrA 并表达、纯化原核表达重组质粒, 观察在氧化应激条件下MsrA的表达水平,为其抗氧化功能的研究提供依据.方法 设计并合成分别带NdeⅠ和XhoⅠ酶切位点的MsrA引物,用PCR方法扩增MsrA基因,构建pET28a-MsrA重组质粒并转化大肠杆菌,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 (isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导重组MsrA蛋白表达,经Ni2+亲和层析分离纯化.利用荧光定量PCR方法,观察在氧化应激条件下MsrA蛋白的表达量.结果 构建了编码MsrA蛋白的重组质粒pET28a-MsrA, SDS-PAGE显示在相对分子质量约22 000处有一明显条带的重组MsrA蛋白,并利用Ni2+亲和层析柱纯化获得纯度较高的MsrA蛋白.氧化应激也可快速诱导MsrA蛋白的表达.结论 成功构建了pET28a-MsrA重组质粒及表达纯化系统,且氧化应激条件下MsrA蛋白表达上调.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谭潇	邵阳学院医学检验系	19	13	2.0	2.0
2	肖非	邵阳学院医学检验系	16	7	2.0	2.0