定点突变对Procaspase-8DEDs蛋白溶解性的影响

• 作者: 孔庆宏 庞威威 张宽仁 王冠林
• 来源期刊: 昆明理工大学学报（自然科学版）
• 学科: 化学
• 关键词: 半胱氨酸蛋白酶-8 定点突变 诱导表达 纯化 死亡效应纤丝
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 生命科学与医学
• 页码范围: 75-80
• 页数: 6页
• 分类号: O629.73
• 语种: 中文
• DOI: 10.16112/j.cnki.53-1223/n.2017.06.012

摘要

在进行人源Procaspase-8 DEDs(也称为Caspase-8 DEDs)蛋白研究时,采用定点突变的方法对野生型(WT) Procaspase-8 DEDs蛋白编码基因的三个位点F122、L123、I128进行突变,并将获得的突变体基因片段构建入表达载体pET-28a(+)和pCMV6-AC-GFP中;在原核细胞中转化入E.Coli Transetta(DE3),获得具有三突变(F122 G/L123 G/I128D)的表达菌株,当以IPTG诱导目的基因表达时,发现突变蛋白(Procaspase-8 DEDsF122G/L123G/1128D)的可溶性表达显著提高;当真核质粒转染细胞HCT116时,与野生型Procaspase-8 DEDs蛋白相比,突变型蛋白不利于死亡效应纤丝(Death Effector Filaments,DEFs)的形成.结果表明:定点突变能提高Procaspase-8DEDs F122G/L123 G/I128D蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达,并经Ni2+蛋白纯化柱和蛋白浓缩柱作用可富集可溶性目的蛋白;同时,在真核细胞中改善了死亡效应纤丝形成问题.本文研究有助于Pro-caspase-8 DEDs蛋白的体外功能研究以及相关细胞系构建.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王冠林		15	35	3.0	5.0
2	张宽仁		19	57	4.0	7.0
3	孔庆宏		7	22	1.0	4.0
4	庞威威		2	0	0.0	0.0