人降钙素原的原核表达、纯化和鉴定

• 作者: 付涛 刘卿 刘原 吴亮 姜旭淦 苏丹华 陈盛霞
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 降钙素原 原核表达 纯化
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 研究生园地
• 页码范围: 226-229
• 页数: 4页
• 分类号: R446.1
• 字数: 3639字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13602/j.cnki.jcls.2017.03.19

摘要

目的 构建人降钙素原(procalcitonin,PCT)原核表达载体,获得高纯度PCT重组蛋白.方法 根据NCBI上PCT基因序列设计引物,利用PCR技术扩增PCT基因,构建PCT/pET-22b(+)重组表达载体,转化至大肠埃希菌(E.coli BL21中诱导表达;采用镍柱亲和层析法纯化重组蛋白,用western blot和肢体金法对其进行鉴定.结果 琼脂糖凝胶电泳结果显示PCR扩增产物约为350 bp.同源性比对分析结果表明,PCT基因片段(348 bp)成功插入pTG19-T载体,未出现碱基突变.用BamH Ⅰ和HindⅢ对重组表达载体双酶切,得到约为350bp和5 500 bp片段.SDS-PAGE电泳显示PCT重组蛋白以可溶性形式存在,Mr约14 000,经镍柱亲和层析法纯化后即可获得.western blot和PCT胶体金法结果呈阳性,显示融合蛋白含组氨酸标签(His-tag),成功表达出PCT重组蛋白.结论 应用重组DNA技术成功构建PCT基因融合重组表达载体,通过蛋白质表达纯化技术获得PCT融合蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈盛霞	江苏大学医学院	48	347	13.0	16.0
2	姜旭淦	江苏大学医学院	48	252	10.0	14.0
3	吴亮	江苏大学医学院	51	245	11.0	15.0
4	苏丹华	江苏大学医学院	7	6	1.0	1.0
5	刘原	江苏大学医学院	7	6	1.0	1.0
6	付涛	江苏大学医学院	6	5	1.0	1.0
7	刘卿	江苏大学医学院	2	1	1.0	1.0