穿膜肽-TDRG1重组蛋白原核表达载体的构建

• 作者: 陈厚仰
• 来源期刊: 现代诊断与治疗
• 学科: 医学
• 关键词: 穿膜肽TAT TDRG1 原核表达载体
• 年，卷（期）: 2017,（17）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 3143-3146
• 页数: 4页
• 分类号: R34
• 字数: 3210字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-8174.2017.17.005

摘要

构建穿膜肽TAT与TDRG1融合蛋白的原核表达载体.以pYD5-TDRG1载体为模板,设计N端和C端含有flag序列和不同酶切位点的引物,利用PCR技术扩增TDRG1基因片段.同时利用内切酶对已构建好的载体pET28a-TAT-EGFP和pET28a-EGFP-TAT进行酶切处理,再把扩增产物插入已处理好的线性载体pET28a(含有TAT)中,构建成重组质粒pET28a-TAT-TDRG1和pET28a-TDRG1-TAT,热激转化到E.coli感受态细胞TOP10中,菌检PCR筛选,送测序比对验证.PCR扩增出TDRG1基因片段,目的插入片段长约344bp,产物行限制性内切酶酶切后连接到预先酶切处理好的线性载体pET28a上,并成功转化到E.coli感受态细胞TOP10中,菌检PCR筛选后挑选阳性克隆抽质粒送测序,测序比对序列完全一致.成功构建了原核表达载体pET28a-TAT-TDRG1和pET28a-TDRG1-TAT.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈厚仰		7	15	2.0	3.0