分子伴侣对A型FMDV结构蛋白VP1在大肠杆菌中可溶性表达的促进作用

• 作者: 冯华 刘畅 刘运超 崔颖磊 张改平 杨棋 王冬雨 王彦伟
• 来源期刊: 河南农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 分子伴侣 VP1蛋白 原核表达 可溶性表达
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 畜牧与兽医科学
• 页码范围: 350-355
• 页数: 6页
• 分类号: S852.4
• 字数: 4483字
• 语种: 中文

摘要

为获得具有活性的A型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)VP1 蛋白,以重组质粒pUC57-MM-VP1为模板,利用PCR扩增得到A型FMDV VP1基因片段,并将该片段插入原核表达载体pET-28a构建重组质粒pET-28a-MM-VP1;之后将该质粒转入E.coli BL21(DE3)进行诱导,同时对诱导温度进行了优化.SDS-PAGE显示,最佳诱导温度为18 ℃,VP1蛋白主要以包涵体形式高效表达;为了提高VP1蛋白可溶性表达,将重组质粒pET-28a-MM-VP1与pTF16共同转入E.coli BL21(DE3)进行诱导表达,并对表达条件进行优化.结果表明,分子伴侣有效提高了 A-VP1 重组蛋白的可溶性表达量,诱导最佳条件为18 ℃、0.1 mmol·L-1 IPTG、2 g·L-1阿拉伯糖、诱导时间20 h.Western-Blot结果表明,得到的重组蛋白能够被抗FMDV的阳性血清识别,反应原性良好.