猪丁型冠状病毒S1基因的克隆、原核表达及多克隆抗体制备

• 作者: 伍锐 刘志鹏 刘浩宇 张雨迪 文心田 文翼平 曹三杰 李成 赵勤 赵玉佳 黄小波
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪丁型冠状病毒 S1基因 克隆 原核表达 抗原性 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1256-1264
• 页数: 9页
• 分类号: S852.659.6
• 字数: 6621字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2018.06.018

摘要

本研究旨在克隆猪丁型冠状病毒(PDCoV)S1基因(1—1 566 bp),体外表达 S1基因抗原表位预测区Sa(106—1 290 bp)蛋白并制备抗该蛋白质的多克隆抗体.运用生物信息学软件分析 S1核苷酸和编码氨基酸序列特征,将 S1基因抗原表位预测区Sa克隆至原核表达载体pET22b(+),构建重组表达载体pET22b-Sa,转化Rosetta(DE3)菌株,IPTG诱导表达、超滤柱浓缩纯化重组蛋白、Ni柱亲和层析,Western blot检测Sa蛋白的活性,将Sa蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体.结果表明,CHN-2015毒株 S1基因开放型阅读框大小为1 566 bp(GenBank No.KY398009),编码522个氨基酸,是具有亲水性的非跨膜蛋白,存在15个潜在的B细胞抗原表位;原核表达Sa重组蛋白,该蛋白质在37 ℃下用终浓度为0.8 mmol·L －1IPTG诱导5 h后,蛋白质主要以可溶性形式存在,免疫印迹显示表达的Sa蛋白在上清与包涵体中都有良好的反应性;用纯化的Sa蛋白四次免疫家兔,获得的兔抗Sa蛋白抗体效价可达1:10 240.本研究克隆了 S1基因,原核表达了Sa蛋白和制备了高效价的兔抗Sa蛋白抗体,具有良好的免疫原性,为后续深入开展S蛋白的功能研究奠定了基础.