TAT介导多肽药物过表达纯化和穿膜活性检测

• 作者: 张梦 张美娴 戴毅 方佳炜 朱焘 杨静 王中山 陈淑漫
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: NR2B羧基端多肽(NR2Pep) TAT穿膜肽 原核表达
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 340-344
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 4027字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2018.03.006

摘要

目的:获得NR2B羧基端多肽(NR2Pep),探讨TAT-NR2Pep在细胞中的跨膜特性.方法:利用酶切连接方法构建pWaldo-TAT-pep质粒,转化大肠杆菌BL21 (DE3)感受态细胞,检测不同浓度诱导剂和不同温度对蛋白质表达的影响;利用镍柱亲和层析及分子筛方法纯化TAT-NR2Pep-GFP融合蛋白,利用GFP发荧光的特性采用In-gel检测蛋白质的表达情况;以融合蛋白C端His标签特异性抗体,通过Western印迹确定融合蛋白的表达;荧光显微镜下观察TAT-NR2Pep-GFP融合蛋白在CHO和C2C12等细胞中的跨膜活性.结果:构建了TAT-NR2Pep-GFP表达载体,重组菌经0.1 mmol/L IPTG于22℃诱导20 h能够表达较多高质量的目标蛋白;In-gel荧光检测证实融合蛋白TAT-NR2Pep-GFP拥有正确构象,GFP能够发出绿色荧光;Western印迹分析表明融合蛋白相对分子质量符合预期;细胞穿膜实验证实TAT能够介导多肽穿过细胞膜.结论:原核表达并纯化得到TAT-NR2Pep-GFP融合蛋白,该蛋白散发绿色荧光,能够穿过细胞膜.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王中山	徐州医科大学江苏省麻醉学重点实验室	6	3	1.0	1.0
2	张梦	徐州市中心医院东南大学附属医院妇产科	4	6	1.0	2.0
3	张美娴	徐州医科大学麻醉学院	2	0	0.0	0.0
4	陈淑漫	徐州医科大学麻醉学院	2	0	0.0	0.0
5	朱焘	徐州医科大学麻醉学院	2	0	0.0	0.0
6	方佳炜	徐州医科大学临床学院	3	0	0.0	0.0
7	杨静	徐州医科大学麻醉学院	8	1	1.0	1.0
8	戴毅	徐州医科大学麻醉学院	2	0	0.0	0.0