苹果转录因子MdHB1的原核表达与多克隆抗体制备

• 作者: 任小林 刘潇然 刘翠华 姜永华 张玉洁 戴杰雨 王豪杰
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 农学
• 关键词: 苹果 转录因子 HD-Zip MdHB1 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2018,（8）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 69-76
• 页数: 8页
• 分类号: S661.1
• 字数: 6793字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-201808012

摘要

HD-Zip转录因子在植物生长发育过程中具有重要作用,蛋白水平的研究有助于进一步阐释其功能.将苹果转录因子基因MdHB1分别连接到pGEX-6p-1和pET-28a(+)表达载体,热激转化大肠杆菌感受态细胞BL21 (DE3),随后用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导培养,分别得到了带有GST和6×His标签的MdHB1融合蛋白(分别命名为MdHB1-GST和MdHB1-His6).十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明,在 18、28 ℃和37 ℃ 3 个温度诱导条件下都是沉淀中MdHB1-GST融合蛋白的量较多,37 ℃尤为明显,较低的诱导温度(18 ℃和28 ℃)能够提高融合蛋白MdHB1-GST可溶性形式存在的比例;28 ℃条件下50 mg/L IPTG诱导的总蛋白量在8 h左右达到最大,且受IPTG质量浓度(10、50、100 mg/L)的影响不大.以Ni-NTA柱纯化的融合蛋白MdHB1-His6为抗原,成年兔免疫以制备多克隆抗体.间接酶联免疫法检测结果表明,所得抗体效价较高.蛋白质免疫印迹实验结果说明,所制备多克隆抗体特异性良好,能够从菌体和苹果幼叶总蛋白中成功检测MdHB1蛋白.综上所述,本实验所得多克隆抗体能够用于深入研究MdHB1在植物体内的功能.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	任小林	西北农林科技大学园艺学院	135	2270	28.0	41.0
2	王豪杰	西北农林科技大学园艺学院	5	32	3.0	5.0
3	姜永华	西北农林科技大学园艺学院	5	45	4.0	5.0
4	刘翠华	西北农林科技大学园艺学院	10	12	2.0	3.0
5	刘潇然	西北农林科技大学园艺学院	4	12	2.0	3.0
6	张玉洁	西北农林科技大学园艺学院	4	11	2.0	3.0
7	戴杰雨	西北农林科技大学园艺学院	1	2	1.0	1.0