毕赤酵母Kex2蛋白酶的同源表达及酶学性质

• 作者: 喻晓蔚 徐岩 王彤
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: Kex2 毕赤酵母 同源表达 酶学性质
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 38-45
• 页数: 8页
• 分类号: Q814
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.20190105

摘要

Kex2蛋白酶是一种来源于酵母的前体加工蛋白酶.利用毕赤酵母(Pichia pastoris)同源表达来源于毕赤酵母的Kex2蛋白酶(PPKex2),研究其表达特性和酶学性质,同时与毕赤酵母表达的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)Kex2蛋白酶(SCKex2)进行比较.首先,分别从毕赤酵母和酿酒酵母基因组中获得Kex2基因,将其插入到表达载体pPIC9K中,并转化毕赤酵母菌株GS115.重组菌株经甲醇诱导表达后,结果表明PPKex2的发酵上清液比活是SCKex2的7倍.Kex2蛋白酶经Q-FF强阴离子交换柱纯化后进行酶学性质研究.酶学性质研究结果表明,PPKex2的最适反应pH是8.0～9.0,最适反应温度是37℃,与SCKex2性质相近.在稳定性方面,PPKex2在pH7.0时最稳定,在碱性条件下的稳定性高于SCKex2,在酸性条件下的稳定性低于SCKex2,另外PPKex2的温度稳定性略低于SCKex2.酶促反应动力学研究表明,PPKex2的kcat和kcat/Km值分别为SCKex2的4.8倍和3.3倍.首次报道了同源表达毕赤酵母Kex2蛋白酶的表达特性及酶学性质,为其今后的研究及应用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐岩	江南大学工业生物技术教育部重点实验室	233	3264	31.0	46.0
3	喻晓蔚	江南大学工业生物技术教育部重点实验室	24	113	6.0	9.0
9	王彤	江南大学工业生物技术教育部重点实验室	2	0	0.0	0.0