莱茵衣藻BBSome组分蛋白BBS4的原核表达、纯化及其多克隆抗体制备

• 作者: Hadiatullah Hadiatullah 周佳兰 孙维越 樊振川 董春明
• 来源期刊: 国际药学研究杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 莱茵衣藻 纤毛 BBS4 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 434-440
• 页数: 7页
• 分类号: R272.1|R349.84
• 字数: 5969字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13220/j.cnki.jipr.2019.06.006

摘要

目的 为了探讨巴德特-别德尔综合征(BBS)蛋白在纤毛信号传导中的作用,本文研究了莱茵衣藻BBS4蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体制备.方法 利用莱茵衣藻bbs4基因的cDNA序列构建原核表达载体pET-28a(+)-bbs4和pMAL-c2X-bbs4,转入大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)后,诱导表达得到带有麦芽糖结合蛋白(MBP)和6×His标签的融合蛋白,用纯化后的带有6×His标签的融合蛋白免疫新西兰白兔,经耳源静脉采血,分离得到抗血清,间接ELISA法测得抗血清的效价,Western印迹法和免疫荧光实验对所制备抗体的特异性进行检测.结果 成功构建了原核表达质粒pET-28a(+)-bbs4和pMAL-c2X-bbs4.6×His-BBS4和MBP-BBS4融合蛋白的相对分子质量分别为4.5×104和8.5×104,经纯化后得到纯度＞85％、浓度＞0.5 mg/ml的目的蛋白用于免疫,测定效价为51 200,经Western印迹法对C.reinhardtii CC-125检测有较高的特异性,实现了莱茵衣藻BBS4蛋白的原核表达和多克隆抗体的制备.结论 成功制备了莱茵衣藻BBS4的多克隆抗体,为BBS4在纤毛病中作用的深入研究奠定了基础.