人SIRT6蛋白的原核表达及纯化

• 作者: 任鑫鑫 冉芳 刘坤 叶棋浓 施亚娇 李玲 梁迎春 罗沙柳 罗菲 马超
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 人SIRT6基因 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 746-750,774
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 3168字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2019.06.003

摘要

目的:构建带GST标签的人源沉默信息调节因子6(SIRT6)基因原核表达载体并表达纯化GST-SIRT6重组蛋白.方法:以人乳腺文库为模板,经PCR扩增,酶切后插入带GST标签的pGEX-KG载体,连接成GST-SIRT6重组质粒进行测序;GST-SIRT6重组质粒转化大肠杆菌BL21感受态,并加入IPTG进行小量诱导,通过Western印迹检测GST-SIRT6蛋白表达;将能成功诱导GST-SIRT6表达的菌液大量扩增,IPTG诱导后利用GST-Sepharose 4B亲和珠纯化GST-SIRT6蛋白,并用考马斯亮蓝染色检测;运用GST Pulldown实验验证SIRT6和缺氧诱导因子HIF1α的相互作用.结果:从乳腺文库中,PCR扩增出约1059 bp的SIRT6基因;诱导GST-SIRT6重组蛋白表达并纯化获得纯度较好的重组蛋白;GST-Pulldown实验检测出有相互作用条带.结论:构建了GST-SIRT6原核表达载体,验证了GST-SIRT6与HIF1α的相互作用,为进一步研究SIRT6在肿瘤发生发展中的作用奠定了基础.