Bax、Bad基因真核表达质粒构建及转染人胚肾细胞后的翻译水平观察

• 作者: 侯筱宇 周敬伟 王孜恒
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: Bcl-2相关X蛋白 Bcl-2相关细胞死亡因子 真核表达质粒 人胚肾细胞
• 年，卷（期）: 2019,（30）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 21-24
• 页数: 4页
• 分类号: R743.31
• 字数: 3461字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2019.30.006

摘要

目的 构建Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Bcl-2相关细胞死亡因子(Bad)基因真核表达质粒pcDNA3.1-Bax、pcDNA3.1-Bad,并观察两质粒转染至人胚肾293(HEK293)细胞后Bax、Bad的表达.方法 采用TRIzol试剂提取大鼠脑组织总RNA,利用反转录—聚合酶链反应(RT-PCR)扩增Bax和Bad的互补DNA(cDNA)序列,将cDNA分别克隆至pcDNA3.1载体上.采用脂质体转染法将序列正确的pcDNA3.1-Bax和pcDNA3.1-Bad真核表达质粒分别转染至HEK293细胞,免疫印迹法鉴定Bax、Bad在细胞中的表达.结果 双酶切和DNA测序分析显示Bax和Bad基因片段成功插入pcDNA3.1载体中,并且与其cDNA(Genbank:NM 017059.2和AF031227.1)序列完全一致.免疫印迹显示pcDNA3.1-Bax、pcDNA3.1-Bad真核表达质粒能够在HEK293细胞中高效表达.结论 pcD-NA3.1-Bax、pcDNA3.1-Bad真核表达质粒构建成功,Bax、Bad在HEK293细胞中成功过表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	侯筱宇		7	1	1.0	1.0
3	王孜恒		1	0	0.0	0.0
7	周敬伟		1	0	0.0	0.0