GFP基因真核表达质粒的构建及其在人胚肾293细胞中的表达

• 作者: 师永霞 李凌 李德良 郑文岭 马文丽
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: 绿色荧光蛋白 pcDNA3.1(+) 293细胞
• 年，卷（期）: 2006,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 8-10
• 页数: 3页
• 分类号: R446
• 字数: 2453字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2006.11.004

摘要

目的克隆绿色荧光蛋白(GFP)基因并构建真核表达载体,观察其在人胚肾293(下称293细胞)细胞中的表达和分布,为制备自行设计的以λ噬菌体为载体的人类免疫缺陷病毒(HIV)核酸疫苗的阳性对照奠定基础.方法以克隆好的pUC18/GFP为模板,根据Genbank中GFP的核苷酸序列设计引物,并在引物的5′端分别引入BamHⅠ及XhoⅠ酶切位点,特异性扩增GFP基因.TA克隆后经双酶切、测序等鉴定重组质粒,再经双酶切、连接构建含GFP编码基因的真核表达载体,酶切鉴定分析后,将该重组质粒通过脂质体介导,转染293细胞.荧光显微镜观察GFP在细胞内的表达和分布.结果重组质粒经BamHⅠ、 XhoⅠ双酶切成5.4kb与0.7kb的片断,表明表达载体pcDNA3.1(+)中插入了GFP基因片断,测序结果表明编码框正确,并在293细胞中获得了表达,分布均匀.结论 pcDNA3.1(+)/GFP真核表达载体已成功构建,并可在293细胞中表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马文丽	南方医科大学基因工程研究所	275	1255	15.0	23.0
2	郑文岭	南方医科大学基因工程研究所	121	603	11.0	20.0
3	李凌	南方医科大学基因工程研究所	38	132	6.0	9.0
4	师永霞	南方医科大学基因工程研究所	11	30	3.0	5.0
5	李德良	南方医科大学基因工程研究所	8	16	3.0	4.0