弓形虫表面抗原糖蛋白相关序列SRS47D基因的原核表达及蛋白定位研究

• 作者: 刘辉 张晓丽 张烨华 杨衡 王旭 米荣升 贾海燕 陈兆国 韩先干 黄燕
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 刚地弓形虫 表面抗原糖蛋白相关序列 原核表达 定位
• 年，卷（期）: 2020,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 17-23
• 页数: 7页
• 分类号: S852.723
• 字数: 4929字
• 语种: 中文

摘要

为表达弓形虫表面抗原糖蛋白相关序列(surface antigen glycoprotein 1-related sequences,SRS47D)并确定其在弓形虫中的定位,本研究将SRS47D基因序列插入原核表达载体pColdⅠ,构建原核表达质粒pColdⅠ-SRS47D,转入大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导后,SDS-PAGE分析重组蛋白表达情况,Western blot分析重组蛋白的反应原性;利用His柱纯化重组蛋白,免疫新西兰兔,制备抗血清,通过间接ELISA检测血清效价;利用免疫荧光法检测蛋白在弓形虫速殖子中的定位.结果显示:成功构建了原核表达质粒pColdⅠ-SRS47D,在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体形式表达,表达产物约为55 kDa;重组蛋白能与感染弓形虫的小鼠血清发生特异性反应,免疫兔血清效价达到1:51200;免疫荧光检测结果显示,SRS47D蛋白分布在弓形虫速殖子表面,尤其前部和后部表膜.上述结果为进一步深入研究弓形虫SRS47D的特性和功能奠定了基础.