新型冠状病毒S蛋白RBD肽段的原核表达与纯化

• 作者: 侯江厚 张灵霞 杨奕梅 詹晓燕 黄国红
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 新型冠状病毒S蛋白 受体结合域(RBD) 原核表达 肠激酶 纯化
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 292-296
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3448字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2020.03.007

摘要

目的:利用原核系统对新型冠状病毒S蛋白的受体结合域(RBD)肽段进行克隆、表达和纯化,制备高纯度的RBD肽.方法:在RBD肽段N端加入肠激酶位点序列(DDDDK),对应的核酸序列参照原核系统表达偏好进行全基因合成,构建pET-DsbC-RBD融合表达载体,通过原核表达和亲和纯化获得DsbC-RBD融合蛋白,用肠激酶对融合蛋白进行酶切和二次亲和纯化,获得高纯度新冠病毒S蛋白RBD肽.结果:构建了pET-DsbC-RBD表达载体,融合蛋白DsbC-RBD在大肠杆菌中实现了高效表达,经亲和层析纯化,重组融合蛋白DsbC-RBD相对分子质量为58×103,纯度约90％.用肠激酶对融合蛋白进行酶切,酶切效率近100％,通过二次亲和纯化获得了RBD肽,相对分子质量为25×103,纯度92％以上.结论:利用原核表达系统获得可溶性DsbC-RBD融合蛋白,采用亲和纯化和肠激酶酶切联用的方法制备获得高纯度的新冠病毒S蛋白RBD肽,为后续抗体制备和抗病毒药物筛选奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张灵霞	解放军总医院第八医学中心	8	30	2.0	5.0
2	杨奕梅		16	3	1.0	1.0
3	詹晓燕		7	0	0.0	0.0
4	侯江厚		2	2	1.0	1.0
5	黄国红		1	0	0.0	0.0