寨卡病毒结构蛋白基因的原核表达及其多克隆抗体的制备

• 作者: 刘靖 华荣虹 张经伟 李伟 步志高 王晗 马乐
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 寨卡病毒 结构蛋白 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 42-47
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.6
• 语种: 中文

摘要

寨卡病毒(ZIKV)是一种重要的人兽共患病病原.为了在原核表达系统表达ZIKV C、prM和E蛋白并制备相应多克隆抗体,本研究首先对ZIKV C、prM和E蛋白基因序列进行密码子优化,合成后克隆至pMAL-c5x载体中,重组质粒转化于E.coliER2523,IPTG诱导表达产物用SDS-PAGE及Western blot进行鉴定并通过MBP亲和层析柱进行纯化;将纯化蛋白免疫新西兰大白兔,制备C、prM和E蛋白的兔源多克隆抗体;用IFA和Western blot检测血清抗体效价及特异性.结果 显示:本研究利用原核表达系统成功表达了ZIKV C、prM和E蛋白,经过MBP亲和层析柱纯化后获得高纯度的目的蛋白;将ZIKV C、prM和E蛋白免疫新西兰大白兔后均诱导产生特异性多克隆抗体,间接免疫荧光试验表明所制备多克隆抗体均能与ZIKV结合,IFA效价分别为1∶1600,1∶1600和1∶3200;Western blot显示制备的多克隆抗体能特异性识别ZIKV C、prM和E蛋白.该研究结果为进一步开展ZIKV相关研究奠定了基础.