转基因检测中大豆蛋白DNA提取方法筛选及其lectin基因降解分析

• 作者: 刘营 杜艳 陈复生 陈晨
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 工学
• 关键词: 大豆分离蛋白 大豆浓缩蛋白 大豆籽粒 DNA提取 实时荧光聚合酶链式反应
• 年，卷（期）: 2020,（4）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 102-111
• 页数: 10页
• 分类号: TS201.6
• 字数: 7114字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-20190702-020

摘要

采用紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳法和实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)等检测DNA浓度、纯度、完整性和反应灵敏度,综合评价Nucleo试剂盒、Wizard试剂盒、Dneasy试剂盒、Ezup试剂盒、Dzup试剂盒和十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)法对大豆蛋白及大豆籽粒中DNA的提取效果,旨在筛选出适用于大豆分离蛋白(soybean protein isolate,SPI)、大豆浓缩蛋白(soybean protein concentrate,SPC)及大豆籽粒中DNA提取的最佳方法,提高转基因大豆检测的精确性和准确性.结果表明,Nucleo试剂盒和Dneasy试剂盒能够得到纯度高、完整性好的DNA,符合实时荧光PCR的检测要求.Dneasy试剂盒提取的DNA纯度更高,更有利于提高后续PCR的重复性、稳定性和精确性,普遍适用于SPI、SPC以及大豆籽粒中DNA的提取.Wizard试剂盒、Ezup试剂盒和SDS法提取效果适中,SDS法成本最低,但耗时最长.Dzup试剂盒得到的DNA虽然浓度高,但含杂质较多,对实时荧光PCR具有抑制作用,且无法保持完整的基因组DNA,不适用于大豆转基因检测中的DNA提取.采用Dneasy试剂盒提取得到的SPI和SPC样品DNA,对不同长度lectin基因扩增结果不同,表明在蛋白制备过程中lectin基因可能存在降解.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈复生	河南工业大学粮油食品学院	347	1647	19.0	27.0
2	杜艳	河南工业大学粮油食品学院	8	3	1.0	1.0
3	陈晨	河南工业大学粮油食品学院	10	37	2.0	6.0
4	刘营	河南工业大学粮油食品学院	1	1	1.0	1.0